核心词：桂花树 桂花树 皂苷 对照 品 比色法 桂花树 皂苷 提取物 皂苷 含量 
　　因此,测定桂花提取物中总皂苷含量的方法如下:溶液在80℃水浴中蒸发后,加入5ml70%硫酸甲醇,在60℃水浴中加热60min,取出,在冰水浴中取出15min,室温放置15min,取相应溶液为空白,在325nm处用紫外可见分光光度法测定吸光度。桂花中的甾体皂苷主要是桂花皂甙。据报道,用薯蓣皂甙元或知母皂苷A-作为对照物质来测定桂花提取物中总皂苷的含量,但这些成分不是桂花提取物中的成分。样品溶于甲醇后,桂花树置于ODS柱上,用甲醇水溶液洗脱,TLC和HPLC检测,与相同组分结合,ODS柱层析纯化,所得样品冻干,得到白色粉末。以相应试剂为空白,用紫外-可见分光光度法扫描400~600nm的吸收光谱。结果如图3所示。本方法用于测定桂花提取物中总皂苷的含量。以相应试剂为空白,用紫外-可见分光光度法扫描350～600nm的吸收光谱。结果如图4所示。溶液显色后稳定性考察:按"4.2"方法配制供试品溶液,准确吸收0.2ml,按"4.4"方法显色后每隔10min测量样品吸光度,计算吸光度RSD值。ESI-MS:1283、1103、757、595、433.重复性考察,取同批样品约10mg,共6份,准确称量,按"4.2"方法配制试液,按"4.4"方法测定,计算样品中总皂苷的含量。取上述白色粉末,加入甲醇制备浓度为1.0mg/ml的溶液,加入5ml70%硫酸甲醇,在60℃水浴中加热显色45、60、75分钟。取出,在室温下放入冰水浴15分钟。
　　1、用紫外-可见分光光度法测定325nm处的吸光度
　　取相应溶液为空白,用紫外-可见分光光度法测定325nm处的吸光度。结果分别为0.429、0.434和0.438。结果在三种不同的展开剂中,样品色谱显示单一粉红色斑点,无杂质斑点,符合中药化学对照品的要求。以对照品含量为横坐标,吸光度为纵坐标,进行线性回归,绘制标准曲线。
　　2、表明PIR=19.002~5.999
　　回归方程为y=0.012x0.002,r=0.9995,表明pieb为19.44~58.32?在G范围内,含量与吸光度之间存在良好的线性关系。样品显示为单峰,面积归一化法显示该峰的相对百分含量大于98%,符合中药化学标准物质含量测定要求（见图,取桂花皂甙提取物10mg,准确称取,置于25ml量瓶中,加入甲醇约20ml,超声处理（功率250W,频率200Hz）30min。13C-NMRδPpm:母核:38.9,30.1,77.9,32.8,48,70.8,40.3,30.7,54.7,36.2,21.3,40.9,41.2,56.3,32.5,81.2,64,16.8,16.5,40.7,16.1110.7,37.1,28.4,34.5,75.3,17.5;3-半乳糖:102.3,73.2,75.6,80.3,76.2,60.7;葡萄糖:105.1,81.5,88.6,70.9,78,63.1;葡萄糖:104.9,75.5,78.5,71.7,7.6,62.8;葡萄糖:104.6,75.3,78.7,71.6,78.6,62.3;26葡萄糖部分:105.2,75.2,78.4,71.7,78.4,62.8。为了研究显色时间,在"4.2"下准确吸取0.2ml3份供试品溶液,将其放入带塞子的试管中,蒸发溶剂。为了研究显色温度,在"4.2"下准确吸取0.2ml3份试液,将其置于堵塞的试管中,并在80℃的水浴中蒸发。
　　3、桂花总皂甙主要为β-皂甙
　　桂花皂甙元主要为β-氯代皂甙元,用薯蓣皂甙元和知母皂甙A-测定桂花中总皂甙的含量。结果表明,该方法具有较高的精度。
　　4、研究发现
　　研究发现,桂花中的皂苷具有抗真菌、抗肿瘤、抗血栓和降低胆固醇的作用。方法学实验表明,该方法准确、重现性好,可用于桂花提取物中总皂苷的含量测定。1HNMRδppm:0.878,1.01,1.20,1.33,4.79,4.91,5.14,5.28,5.55。根据HPLC测试,分析条件如下:流动相为乙腈-水,梯度洗脱0~15min,24%~40%;ELSD检测条件:漂移管温度105℃,载气流速2.7l/min,进样量10?与硫酸溶液相比,硫酸溶液的吸光度随硫酸浓度的增加而显著增加。
　　5、结果表明
　　结果表明,硫酸溶液的吸光度随硫酸浓度的增加而增加,而不是随硫酸浓度的增加而增加。因此,选择70%硫酸甲醇作为显色剂。结果表明,香兰素-高氯酸显色后溶液的紫外-可见吸收光谱的最大吸收量不同,茴香醛-硫酸显色后溶液的紫外-可见全波长扫描光谱的峰型也有很大差异。
　　6、试验样品和对照样品的吸收峰相同
　　硫酸-甲醇显色后,试验样品和对照样品的吸收峰相同,在325nm处有最大吸收峰。因此,选择硫酸-甲醇显色法,并选择325nm作为测定波长。取出,加甲醇至刻度,摇匀,过滤,按"4.4"方法测定,计算总皂苷回收率。结果见表1。结果表明,样品中总皂苷的平均含量为42.63%,RSD=1.2%,表明该方法重复性好。硫酸-甲醇也可用作皂甙尤其是甾体皂甙的显色剂,具有良好的灵敏度和稳定性。因此,本研究中使用了这种显色剂。文献中用于测定甾体皂苷的参考物质大多也是螺甾醇皂苷,对呋甾醇皂苷显色方法的研究较少。加入0.2ml5%香兰素冰醋酸溶液和0.6ml高氯酸,摇匀,在90℃水浴中保温60min,取出放入冰水浴10min,取出后精确加入10ml冰醋酸,摇匀。合并正丁醇,减压回收,置于硅胶色谱柱上,氯仿-甲醇-水梯度洗脱,气相色谱和高效液相色谱检测,合并相同组分,减压回收干燥。准确吸收0.6,0.8,1.0,1.2,1.4和1.8ml,并按照"4.4"中的方法进行测定。加入0.5ml茴香醛硫酸显色剂（取0.1ml茴香醛,加入18.9ml无水乙醇溶解,加入1ml硫酸摇匀）,摇匀,在100℃水浴中保温15min,取出放入冰水浴中10min,取出后精确加入10毫升无水乙醇,摇匀。喷洒10%硫酸乙醇溶液,在105℃下加热,直到斑点清晰。结果表明,供试品溶液显色后60min内吸光度的RSD为1.1%,表明供试品溶液显色后60min内吸光度稳定。加入5ml硫酸甲醇,摇匀,在60℃水浴中保温60min,取出放入冰水浴中10min,取出摇匀。取每批桂花提取物样品约10mg,准确称量,按"4.2"方法配制试液,按"4.4"方法测定。结果分别为65.51%、65.31%和69.19%。结果表明,供试品溶液在8h内的吸光度RSD为1.3%,表明供试品溶液在制备后8h内稳定。
　　7、氯仿
　　氯仿、甲醇、冰醋酸、高氯酸、香兰素、茴香醛、硫酸和无水乙醇（均为分析纯,北京化工厂）;乙醇是医用酒精;硅胶（青岛海洋化工厂柱层析用）;硅胶G薄层色谱板（青岛海洋化工厂）;大孔树脂AB-8（天津南开大学化工厂）;C18反相硅胶（日本雅马哈）;桂花皂甙提取物（自制）。虽然其苷元的结构与β-氯霉素相似,但仍存在一些差异。用它们作为桂花中皂苷含量测定的参考物质并非最佳选择。根据TLC测试,吸收上述溶液10分钟?50.指向三个硅胶G薄层板,分别用氯仿-甲醇下层水溶液、氯仿-乙酸乙酯-甲醇下层水溶液和正丁醇-乙酸乙酯上层水溶液显影,取出并干燥。结果发现,在硫酸-甲醇显色后,对照溶液和试验溶液的紫外-可见吸收光谱相同,并且在325nm处都有最大吸收。通过熔点、核磁共振和质谱的检测,并通过数据对比,对样品进行了分析
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